一.ELISA試劑盒采用雙抗原一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被病毒性腹瀉病毒抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測抗原，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。用酶標(biāo)儀在450NM波長下測定吸光度(OD值)，與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中豬病毒性腹瀉病毒(BVDV)的存在與否。

　　二.方法類型和操作步驟

　　雙位點(diǎn)一步法在雙抗體夾心法測定抗原時(shí)，如應(yīng)用針對抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體，則在測定時(shí)可使標(biāo)本的加入和酶標(biāo)抗體的加入兩步并作一步（圖15-5）。這種雙位點(diǎn)一步不但簡化了操作，縮短了反應(yīng)時(shí)間，如應(yīng)用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應(yīng)用使測定抗原的ELISA提高到新水平。

　　在一步法測定中，應(yīng)注意鉤狀效應(yīng)（hookeffect），類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象。當(dāng)標(biāo)本中待測抗原濃度相當(dāng)高時(shí)，過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合，而不再形成夾心復(fù)合物，所得結(jié)果將低于實(shí)際含量。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

　　產(chǎn)品特點(diǎn)

　　一、、靈敏、特異的抗體;

　　二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;

　　三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體;

　　四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型;

　　五、節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

　　ELISA試劑盒回收率是反應(yīng)待測物在樣品分析過程中的損失的程度，損失越少，回收率越高，如果作標(biāo)液1PPM，就是1毫克/升，而作出標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)為0.99毫克/升，就是說你的回收率是99%，這個(gè)與真實(shí)成分有密切的關(guān)系，說明方法的準(zhǔn)確度。比如水中總無機(jī)氯含量測定，樣品水中含有無機(jī)氯20mg/L，取100mL被測水樣品，加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無機(jī)氯標(biāo)準(zhǔn)樣品，測定時(shí)忽略體積變化，如果測定出樣品中無機(jī)氯為29.8mg/L，則認(rèn)為回收率為99%。